畜牧业规模化养殖程度的提高使抗生素类药物作为疾病治疗药物和饲料添加剂在动物饲养过程中应用日益频繁化和常态化。然而抗生素的不合理使用导致动物源性食品中抗生素残留,严重威胁人类健康。本研究以链霉亲和素修饰磁珠作为分离富集系统,以负载不同指示剂的聚多巴胺银纳米颗粒作为比色信号来源,利用适配体的特异性识别功能开发了pH响应式3通道抗生素快速检测试剂盒,30 min内即可实现对土霉素、卡那霉素、链霉素的快速灵敏检测,开发的试剂盒不仅具有便携化、高效化、批量化的优势,而且操作简单,可以大大缩减检测时间,能够满足实际生产需求,为目标物的现场检测分析提供了重要的技术支撑,在生物医学、环境监测及食品安全保障领域具有广阔的应用前景。
1.引入聚多巴胺纳米材料作为信号分子负载元件,适配体作为特异性关键识别元件构建抗生素快速检测试剂盒,具有成本低廉,制备简单等优点,有利于提高目标物检测的特异性、灵敏度和多重性,在材料上是一种创新。
2.磁珠能够在复杂的体系中快速捕获、富集和分离多种类型的分析物,具有流动性和固体磁性颗粒材料的双重特点,可以使固—液相的分离变得更加方便快捷。通过对其表面进行修饰可以增加信号标记物的负载量,实现检测信号的放大,提高检测体系的灵敏度。
3. 以生物传感技术为基础构建抗生素快速检测试剂盒,与传统研究手段相比不需要复杂的仪器设备,且灵敏度和精确度更高,利用它对抗生素进行精确定量,在方法学上是一种创新,为抗生素残留检测提供了便利,对保障动物源性食品安全具有重要意义。
1.该检测方法灵敏度较高,可以实现土霉素、卡那霉素、链霉素在1 pg/mL-100 ng/mL、1 pg/mL-100 ng/mL、10 pg/mL-100 ng/mL线性范围内的检测,检测限分别为0.39 pg/mL、0.78 pg/mL和1.47 pg/mL。
2.该检测方法具有较好的特异性和抗干扰能力,能够实现实际样品(牛奶)中土霉素、卡那霉素、链霉素的检测。回收率分别为97.3%-103%、95.4%-104.7%、100.6%-104.1%,具有一定的实际应用价值。
1.试剂盒分别由四种试剂组成,A液:Cp/Apt双链DNA修饰的磁珠;B液:信号元件PDANS@Ag/Sp/指示剂;C液:碱性溶液;D液:KH2PO4缓冲液。
2.试剂盒检测方法步骤为:取A液20 μL,加入20 μL待测抗生素样品和10 μL KH2PO4缓冲液,混匀后于金属浴37℃孵育15 min,用D液磁性分离洗涤3遍后,加入20 μL D液和200 μL B液,混匀后于金属浴中37℃孵育15 min,取出后用D液磁性分离洗涤3遍,加入200 μL C液后观察显色结果。
3. 试剂盒储藏方法:置于4℃保存。